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Thermo Pierce™ 細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒

Thermo Scientific 細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒是一整套試劑，用于對哺乳動物細(xì)胞蛋白進(jìn)行選擇性生wu素化，并隨后進(jìn)行純化，以排除細(xì)胞內(nèi)蛋白。

細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒的特點(diǎn)：

•分離細(xì)胞表面蛋白—降低總細(xì)胞蛋白復(fù)雜性
•高效回收標(biāo)記蛋白—通過可裂解生wu素，可幾乎回收分離的細(xì)胞表面蛋白
•便利—一個試劑盒中提供了所有試劑以及細(xì)胞表面膜蛋白標(biāo)記、細(xì)胞裂解和純化的完整說明
•Western 印跡應(yīng)用—在 SDS-PAGE 緩沖液中回收的蛋白可直接上樣至聚丙烯酰胺凝膠
•穩(wěn)健的系統(tǒng)—方案設(shè)計(jì)用于多種細(xì)胞系，包括 NIH 3T3、HeLa、C6 和 A431

該試劑盒可高效標(biāo)記具有可獲取賴氨酸殘基和充分細(xì)胞外暴露的蛋白。分離程序使用不可透過細(xì)胞的可裂解生wu素化試劑（Sulfo-NHS-SS-生wu素）來標(biāo)記完整貼壁或懸浮細(xì)胞表面的蛋白上暴露的伯胺。之后收獲并水解經(jīng)處理的細(xì)胞，并使用 Thermo Scientific NeutrAvidin 瓊脂糖樹脂對標(biāo)記的表面蛋白進(jìn)行親和純化。分離出的細(xì)胞表面蛋白含一個原來標(biāo)記伯胺、但不再生wu素化（生wu素保持連結(jié)至樹脂）的小型、非反應(yīng)標(biāo)記。該試劑盒含足以進(jìn)行八次實(shí)驗(yàn)的試劑，每次實(shí)驗(yàn)涉及裝有融合細(xì)胞的四個 T75 瓶。

細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒已成功用于標(biāo)記和純化細(xì)胞表面蛋白。在一次實(shí)驗(yàn)中，使用或不使用 Sulfo-NHS-SS-生wu素處理 HeLa 細(xì)胞，并根據(jù)試劑盒程序?qū)?xì)胞進(jìn)行處理。通過 Western 印跡分析收集的組分，包括洗脫、流過物和洗脫后凝膠。在用生wu素標(biāo)記處理的細(xì)胞的洗脫組分中鑒定出四種細(xì)胞表面蛋白。這些蛋白包括表皮生長因子受體 (EGFR)、胰島素樣生長因子-1 受體 β IGF (IGF-1β)、整合素 1 和整合素 5。與之形成鮮明對比的是，在未標(biāo)記細(xì)胞的洗脫組分中未鑒定出這些蛋白；未標(biāo)記蛋白僅在流過物中發(fā)現(xiàn)。此外，還在來自標(biāo)記細(xì)胞的流過物組分中鑒定出一些細(xì)胞表面蛋白。由于空間位阻，這些蛋白很可能未被標(biāo)記。洗脫后凝膠組分中存在的已捕獲蛋白量可忽略不計(jì)，表明已捕獲蛋白回收率將近 。在所有檢測樣品的洗脫組分中檢測到了痕量熱休克蛋白 90 (Hsp90)，表明細(xì)胞表面與細(xì)胞內(nèi)蛋白標(biāo)記具有特異性。

Thermo Pierce™ 細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒